色譜柱使用經(jīng)驗(yàn)

色譜柱在使用前，進(jìn)行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價(jià)柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測試時(shí)是按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠測試所使用的條件是zui佳條件)，只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。

1、樣品的前處理：a、使用流動相溶解樣品。b、使用予處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。 c、使用0.45µm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。

2、流動相的配制：液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動相具備以下的特點(diǎn)：a、流動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時(shí)間保留在柱中)。b、流動相具有一定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外)。c、流動相的黏度要盡量小，以便在使用較長的分析柱時(shí)能得到好的分離效果；同時(shí)降低柱壓降，延長液體泵的使用壽命(可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。d、流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器，使用對紫外吸收較低的溶劑配制。e、流動相沸點(diǎn)不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無法進(jìn)行。f、在流動相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。

3、流動相流速的選擇：因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱，要追求zui佳柱效，使用zui佳流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml/min，對于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml/min為佳。當(dāng)選用zui佳流速時(shí)，分析時(shí)間可能延長。可采用改變流動相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時(shí)間(如使用反相柱時(shí)，可適當(dāng)增加甲醇或乙jing的含量)。

注意：a.由于甲醇廉價(jià)，對于反相柱推薦使用甲醇體系(必須使用乙jing的場合除外)。 b.對于正相柱推薦使用沸程為30-60℃的石油醚或提純后的己烷作流動相，沒有提純的己烷不得使用。用水使用超純水(電阻率大于18兆歐)，去離子水及雙蒸水中含有酚類雜質(zhì)，有可能影響分析結(jié)果。c.含水流動相最*在實(shí)驗(yàn)前配制，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要過夜。加入疊氮化鈉，防止細(xì)菌生長。d.流動相要求使用0.45 µm濾膜過濾，除去微粒雜質(zhì)。e.使用HPLC級溶劑配制流動相，使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命，提高柱性能。

沖柱子的目的只要是有機(jī)溶劑就行，不過黏度不要太大，因?yàn)橛袡C(jī)溶劑能夠防止細(xì)菌生長，沖柱子的目的就是為了防止細(xì)菌生長堵塞儀器系統(tǒng)和柱子。一般甲醇和乙jing相互沖洗是沒有問題的，但乙jing要比甲醇價(jià)格貴的 。

保留時(shí)間變化的原因

柱頭塌陷在使用過程中，填料下沉，在柱子進(jìn)口處出現(xiàn)一個(gè)小空間，使得分離效果不良。

補(bǔ)救方法：卸開柱頭螺絲，找一點(diǎn)同類填料，用甲醇濕潤后，添在柱子上，反復(fù)幾次。然后裝上螺絲，用溶劑沖洗1-2小時(shí)，使之平衡。

小結(jié)正確使用緩沖鹽很有必要，既可以防止緩沖鹽析出，也可以達(dá)到提高色譜柱使用壽命的目的。我們不妨用一句話來總結(jié)它的使用方法：用前要過濾，用后需沖洗。（來源實(shí)驗(yàn)與分析）