滅活型保存液是病毒保存液的一種,主要用于滅活病毒后對病毒的存儲作用,并且滅活型病毒保存液可以有效防止使用人員的二次感染。其特點是可以快速的滅活病毒,將病毒蛋白膜衣殼降解掉,并將病毒核酸釋放出來。目前,社會上席卷全球的新冠病毒就是釋放和降解RNA病毒,這樣即可進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄后PCR擴(kuò)增實驗,達(dá)到利用核酸檢測病毒的目的。
滅活型病毒保存液中除了含有裂解的成分,通常還含有讓蛋白變性破壞膜結(jié)構(gòu)的去污劑、生物緩沖劑以及防止核酸酶降解核酸的抑制劑、還有維持核酸結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的試劑等。裂解體系還可能加入蛋白酶,將蛋白切成小片段,促進(jìn)蛋白質(zhì)與核酸的分離。
目前,已知的裂解病毒的方法有很多種,現(xiàn)在比較常見的兩種是加熱法和濃鹽法:
濃鹽法是用高濃度的鹽可以破壞核酸與蛋白質(zhì)之間的次級鍵,使核蛋白解聯(lián)從而把病毒核酸釋放出來。通常使用***胍、異硫***酸胍或非胍鹽裂解鹽,可以直接裂解滅活病毒,不需要加熱處理樣本,比較簡單。
加熱法是通過加熱到80℃~100℃的溫度值基礎(chǔ)上,因為一般樣本都是-70℃冷凍的,一般需要加熱5~10分鐘,這種操作比較簡單,只用一步就可以得到用于核酸PCR擴(kuò)增的模板,不需要任何離心、抽提等操作步驟,比常用的CheleX100提取方法和苯酚/氯仿等方法要快。這種方法雖然簡單,但是提取的核酸含量會比較少。
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