分析現(xiàn)有轉(zhuǎn)運(yùn)鼻咽拭子病-毒標(biāo)本的液體培養(yǎng)基可以看出,目前液體培養(yǎng)基主要關(guān)注兩類問題,一方面是液體培養(yǎng)基配方本身的性能問題,需解決非滅活型保存液如何更完整地保存病-毒的原始性狀及活性,滅活型保存液如何滅活病-毒的同時有效保護(hù)核酸不被核酸酶降解,各種保存液如何保證樣本保存液采集標(biāo)本后的存儲條件溫和且保存時間盡量延長等問題;另一方面關(guān)注的問題主要是保存液如何提高產(chǎn)品穩(wěn)定性及滅活型。在這兩方面,德晟公司針對病-毒保存液做出了相應(yīng)的處理。
非滅活型保存液——提高產(chǎn)品穩(wěn)定性
因市面上很多現(xiàn)有的非滅活型樣本保存液成分富含氨基酸、蛋白質(zhì)等營養(yǎng)物質(zhì)容易滋生微生物,且抗生素類物質(zhì)無法耐受高溫、輻照等滅菌方式。為了保持產(chǎn)品的穩(wěn)定性,德晟研發(fā)生產(chǎn)的非滅活病-毒保存液是不含裂解鹽,但是保存的病-毒完整性更好,檢出率更高,除了核酸檢測外還可以用于其他研究。它具有抗細(xì)菌和抗真菌的作用;牛血清白蛋白(BSA)作為蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑,可在病-毒的蛋白質(zhì)外殼形成一種保護(hù)膜,使其不易分解,保證病-毒的完整性;Hanks緩沖液構(gòu)建的中性環(huán)境,有助于增加病-毒的生存時間和感染穩(wěn)定性。再就是對菌落的控制我們是非常嚴(yán)格的,以免產(chǎn)品出現(xiàn)長菌現(xiàn)象。
滅活型保存液——提高產(chǎn)品滅活性
關(guān)于滅活型樣本保存液的相關(guān)研究表明,常用的病-毒裂解劑 AVL 和 RLT 緩沖液處理后的病-毒仍然存活,這提示我們對滅活型樣本保存液針對特定病-毒的滅活能力應(yīng)當(dāng)進(jìn)行相應(yīng)的臨床評估。還有研究表明,一旦加入乙醇,AVL 就可以完全滅活 EBOV 病-毒,但這與下游自動核酸提取系統(tǒng)不兼容。這提示我們改進(jìn)滅活型樣本保存液的同時還應(yīng)驗(yàn)證對下游核酸提取及檢測的影響。
德晟和高校專家獨(dú)家研制的滅活型病-毒保存液,含有特殊的蛋白變性劑和核酸穩(wěn)定劑,蛋白變性劑可以迅速破壞病-毒外殼蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu),將病-毒滅活。當(dāng)帶有新冠病-毒的臨床樣本與保存液混合,樣本中的病-毒受裂解液作用,蛋白質(zhì)外殼被迅速破壞,并且這種破壞是不可復(fù)原的。核酸穩(wěn)定劑可以常溫穩(wěn)定保存病-毒核酸不降解,可以在37℃條件下穩(wěn)定保存7天,非常利于核酸檢測的樣本保存。